QPCR实验

 

荧光定量PCRqPCR)利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过ct值和标准曲线对起始模板进行定量分析。

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qPCR技术已广泛应用于临床及生命科学研究的各个领域中,在科研方面可定量分析各种基因的表达分析,基因突变和多态性分析;在医疗方面,可用于临床疾病早期诊断、病原体的分子检测、肿瘤的分子诊断等。实验室通过设计针对目的基因的特异性引物或探针,并优化反应体系和反应循环参数,已成功地建立了快速、灵敏、特异的qPCR检测方法,为基因定量检测和准确定量疾病相关基因的表达提供了有效的技术手段。

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qPCR技术已广泛应用于分析lncRNA的表达水平和模式,通过该技术不仅可以验证lncRNA的组织特异性表达的特点,而且可以作为一种重要的技术手段来验证lncRNA芯片和lncRNA-seq的实验结果。而qPCR检测相对lncRNA的其他检测技术而言,更加快捷、方便,已经逐渐成为检测lncRNA表达的主流技术。

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在高通量测序技术出现之前,研究者大多采用生物化学结合生物信息学的方法开展miRNA的研究,随着miRNA测序技术的突破,更多未知的miRNA被发现。基于高通量测序平台发现的miRNA,基因芯片和qPCR技术被广泛用于miRNA的表达和定量的分析。

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circRNA的主要研究内容包括circRNA鉴定、circRNA表达模式和生物学功能研究3个方面。circRNA表达模式以及生物学功能的研究利用了一些常用的生物学技术,如circRNA-seq,基因芯片分析,Northern blotqRT-PCR等,这些技术与生物信息学软件相结合,多种生物学技术的结合运用,可以分析circRNAmiRNA的潜在结合位点,同时也可以探究circRNA在疾病或某些生理过程的作用机制,为更深入的了解circRNA提供了技术上的支持。

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