环状RNA定量PCR服务

mRNA定量PCR服务
2017年3月9日
lncRNA定量PCR服务
2017年3月9日

环状RNA定量PCR服务

环状RNA实时定量PCR检测时高通量筛选后验证的必选实验,基于qPCR检测技术的circRNA表达与差异分析师对测序、芯片结果的有效补充和验证,是确定研究对象并进行后续功能研究或分子标志物筛选的基础。

上海其明生物根据circRNA的闭合环状结构,针对其接头序列设计Divergent primers,能有效与线性RNA区分开来,排除线性RNA干扰。我们专业的引物设计和PCR反应体系优化,可有效保障检测数据的准确性和可靠性,可检测包括细胞、组织、血液和外泌体等多种样本中环状RNA差异表达情况。

 

技术优势

  • 准确性

针对circRNA拼接位点,设计跨接头引物,即便在相应线性RNA存在的情况下也能特异性检测circRNA,使circRNA的检测准确可靠;

  • 特异性

每一对特异引物都经过实验验证,熔解曲线都呈单峰,电泳条带均呈单一条带,扩增产物与目的基因相符;

  • 专业性

每对circRNA引物均由有着多年circRNA研究经验的专业人员进行设计,并通过实验严格验证引物的特异性,保证研究结果的可靠性。

  • 可定制

“环状RNA引物库”已验证特异性引物达到2000多对,用户可自由定制,灵活选择,大大节约研究时间。

  • 流程

  • 产品参数
产品类型 平台 周期
circRNA qPCR   AriaMx 实时荧光定量 PCR 系统

样本种类 单个样本量
组织 100mg
血液 300μl
细胞 ≥5×106
RNA ≥1.5ug

OD260/OD280=1.8~2.0

circRNA ≥1.5ug

OD260/OD280=1.8~2.0

PS:同时提供待测circRNA序列号

  • 扩增曲线

  • 熔解曲线

  • 数据分析

采用相对定量法2-△△Cq来计算基因的相对表达量。

常见问题

1PCR和QPCR有什么区别?

① 荧光定量 PCR (QPCR)能够实时监测 PCR 反应的全过程,对每一个循环进行定量定性分析;而普通 PCR 只能对反应的终产物进行半定量定性分析。
② QPCR 的结果分析可以直接通过电脑读出,而普通 PCR 的结果必须通过下一步的电泳条带分析。

2绝对定量和相对定量有什么区别?

荧光定量有两种定量类型,分别为绝对定量和相对定量。这两种定量方法的不同点在于:
       目的不同:绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目,即通常所说的拷贝数;相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例,而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数;
实验方法不同:绝对定量必须使用已知拷贝数的标准品,必须做标准曲线;而相对定量可以做标准曲线,也可以不做标准曲线,仅利用Ct值的不同来分析实验结果。

3绝对定量和相对定量的选择?

绝对定量的标准曲线法和相对定量的比较Ct法是我们最擅长的两种实验方案。不论哪种方案,我们均采用染料法(即SYBR Green I)作为检测方法。
标准曲线法,将标准品稀释至不同浓度,作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标,以测得的CT值为纵坐标,绘制标准曲线,对未知样品进行定量时,根据未知样品的CT值,即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。
比较Ct法,也就是2^(-△△CT)法。其中△△CT=(待测组目的基因Ct值-待测组内参基因Ct值)-(对照组目的基因Ct值-对照组内参基因Ct值),因此,2^(-△△CT)表示实验组目的基因的表达相对于对照组的而变化倍数,使用这一方法可以直接得到目的基因相对于内参基因的量。比较CT法的优点是不需构建标准品,节省时间、试剂,缺点是必须确定待测基因和看家基因的的扩增效率,效率接近时结果才可靠,否则结果不能用。

 

联系咨询,请扫下方二维码!

发表评论

电子邮件地址不会被公开。 必填项已用*标注